产品货号：
BTN14-18000
中文名称：
狂犬病病毒荧光定量RT-PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Rabies Virus RT-qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒根据RT-PCR原理开发。
狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)属于弹状病毒科狂犬病毒属，为RNA病毒，它是引起狂犬病的病原体。狂犬病毒会引发狂犬病，属于人畜共患的传染病，由于该病毒能对人体健康造成严重损害，因此快速检测狂犬病病毒具有重要意义。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释阳性对照(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
注意：本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的核酸片段作为阳性对照。下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。
二、样品RNA的制备
三、设置RT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：狂犬病病毒荧光定量RT-PCR试剂盒(染料法)，Rabies Virus RT-qPCR Kit(SYBR)
狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)属于弹状病毒科狂犬病毒属，为RNA病毒，它是引起狂犬病的病原体。狂犬病毒会引发狂犬病，属于人畜共患的传染病，由于该病毒能对人体健康造成严重损害，因此快速检测狂犬病病毒具有重要意义。
- 使用本公司开发的一管式荧光定量RT-PCR试剂盒，灵敏度比常规RT-PCR高2～3个数量级，可以达到几百拷贝/反应。
- 封闭式，避免扩张产物对后续实验的污染。
- 根据狂犬病病毒的保守序列设计的专一性RT-PCR引物，与相关病毒无交叉反应。
- 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
- 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量RT-PCR。
- 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
| 组分 | 规格 |
| 2×qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 10×qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| ROX染料I，50× | 20μL |
| ROX染料II，50× | 20μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 狂犬病病毒RT-PCR引物混合物 | 100μL |
| 狂犬病病毒RT-PCR阳性对照(1×108 copy/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释阳性对照(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
注意：本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的核酸片段作为阳性对照。下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。
- 标记6个RNase-free离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯RNase-free枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，从6号管中取5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第4号(浓度为1×104 copy/μL，10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×105 copy/μL，10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
- 用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送15次RNA病毒裂解液试用装(一管式病毒RNA提取试剂盒的成分)，其使用手册可以从本公司网站www.bjbalb.com，通过搜索产品名称一管式病毒RNA提取试剂盒或产品编号3073下载。
三、设置RT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照，6个用于RT-PCR阳性对照)。如果做2-3
次重复，则反应设置数量相应增加。 - 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后最后加)：
注：成分 样品管
N+2个RT-PCR
阴性对照RT-PCR阳性对照
(2～7管)2×qRT-PCR缓冲液 10μL 10μL 各10μL 狂犬病病毒RT-PCR引物混合物 2μL 2μL 各2μL 50×ROX(见注) 0.4μL 0.4μL 各0.4μL 样品制备所得RNA模板(来自于第8步) 5.6μL 不加 不加 稀释所得6个阳性对照(来自于第6步) 不加 不加 各5.6μL 10×qRT-PCR酶混合液 2μL 2μL 2μL
需使用ROX染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。
需使用ROX染料II的机型：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon(II)Corbett Rotor Gene 3000。
不需要使用ROX的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System，LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene3000、RotorGene 6000。 - 盖上盖子后上机，按下面参数进行RT-PCR(具体RT-PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
过程 温度 时间 RT(逆转录) 50℃ 15～30分钟 预变性 94℃ 5分钟 RT-PCR反应
(40个循环)94℃ 20秒 62℃ 20秒(采集SYBR通道的荧光信号) 72℃ 20秒 按仪器预设程序进行溶解曲线分析
四、数据处理
- 如果PCR阳性对照和PCR阴性对照均得到预期阳性和阴性结果，则说明PCR有效，可以进行后续分析。以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果PCR阳性对照或PCR阴性对照任何一个没有得到预期阳性和阴性结果(如PCR阳性对照没有扩增，或阴性对照出现扩增)，则说明PCR实验无效或污染，不需要进行后续分析，需要重复PCR或请跟厂家联系。
- 如果样品制备阳性对照或样品制备阴性对照均得到预期阳性和阴性结果，说明样品制备操作有效，实验结果有效。
- 如果样品制备阳性对照或样品制备阴性对照任何一个没有得到预期结果(如样品制备阳性对照无扩增，或样品制备阴性对照有扩增)，说明样品制备操作无效或有污染，实验结果无效，需要重复样品制备过程或请跟厂家联系。
相关搜索：狂犬病病毒荧光定量RT-PCR试剂盒(染料法)，Rabies Virus RT-qPCR Kit(SYBR)